詳細(xì)介紹
熒光定量PCR檢測(cè)廠家與普通PCR的區(qū)別:理論上PCR是一個(gè)指數(shù)增長(zhǎng)的過(guò)程,但是實(shí)際的PCR擴(kuò)增曲線并不是標(biāo)準(zhǔn)的指數(shù)曲線,而是S形曲線。
熒光定量PCR檢測(cè)廠家這是因?yàn)殡S著PCR循環(huán)的增多,擴(kuò)增規(guī)模迅速增大,Taq酶、dNTP、引物,甚至DNA模板等各種PCR要素逐漸不敷需求,PCR的效率越來(lái)越低,產(chǎn)物增長(zhǎng)的速度就逐漸減緩。當(dāng)所有的Taq酶都被飽和以后,PCR就進(jìn)入了平臺(tái)期。由于各種環(huán)境因素的復(fù)雜相互作用,不同的PCR反應(yīng)體系進(jìn)入平臺(tái)期的時(shí)機(jī)和平臺(tái)期的高低都有很大變化,難以精確控制。所以,即使是96次PCR重復(fù)實(shí)驗(yàn),各種條件基本*,所得結(jié)果有很大差異,所以在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中我們不能根據(jù)zui終PCR產(chǎn)物的量直接計(jì)算出起始DNA拷貝數(shù)。
技術(shù)于1996年由美國(guó)Applied Biosystems公司推出,由于該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規(guī)PCR相比,它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問(wèn)題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn),目前已得到廣泛應(yīng)用;實(shí)時(shí)熒光定量
的方法:熒光定量PCR所使用的熒光化學(xué)可分為兩種:熒光探針和熒光染料。而熒光定量 PCR 的方法相應(yīng)的可分為特異類和非特異類兩類,特異性檢測(cè)方法是在PCR反應(yīng)中利用標(biāo)記熒光染料的基因特異寡核苷酸探針來(lái)檢測(cè)產(chǎn)物;而非特異性檢測(cè)方法是在在PCR反應(yīng)體系中,加入過(guò)量熒光染料,熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,發(fā)射出熒光信號(hào)。前者由于增加了探針的識(shí)別步驟,特異性更高,但后者則簡(jiǎn)便易行。