詳細介紹
熒光定量PCR技術服務SYBR Green特性:
(1)只有和雙鏈DNA結合后才發(fā)熒光。
(2)變性時,DNA雙鏈分開,無熒光。
(3)在延伸結束階段采集熒光信號。
(4)SYBR Green也能和非特異性的雙鏈DNA結合發(fā)光,所以必須在反應結束時做熔解曲線分析。
熒光定量PCR技術服務PCR技術于1996年由美國Applied Biosystems公司推出,由于該技術不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規(guī)PCR相比,它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,目前已得到廣泛應用。
TaqMan探針的特性:
(1)5′端標記有報告基團(Reporter, R),如FAM、VIC等
(2)3′端標記有熒光淬滅基團 (Quencher, Q)
(3)探針完整,R所發(fā)射的熒光能量被Q基團吸收 ,無熒光, R與Q分開,發(fā)熒光(4)Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性,可水解探針。
定量的標準樣品:
(1)含有和待測樣品相同擴增片段的克隆質粒
(2)含有和待測樣品相同擴增片段的cDNA
(3)PCR的產物,可分別做系列稀釋。