詳細(xì)介紹
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號 |
小腸 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 上皮細(xì)胞樣 | YS-01X7984 |
細(xì)胞簡介:
兔小腸隱窩上皮分離自小腸組織;小腸位于腹中,上端接幽門與胃相通,下端通過闌門與大腸相連,是食物消化吸收的主要場所。小腸盤曲于腹腔內(nèi),上連胃幽門,下接盲腸,分為十二指腸、空腸和回腸三部分。小腸內(nèi)消化是至關(guān)重要的,因?yàn)槭澄锝?jīng)過小腸內(nèi)胰液、膽汁和小腸液的化學(xué)性消化及小腸運(yùn)動的機(jī)械性消化后,基本上完成了消化過程,同時營養(yǎng)物質(zhì)被小腸粘膜吸收了。小腸管壁由粘膜、粘膜下層、肌層和漿膜構(gòu)成。其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是管壁有環(huán)形皺襞,粘膜有許多絨毛,絨毛根部的上皮下陷至固有層,形成管狀的腸腺,其開口位于絨毛根部之間。絨毛和腸腺與小腸的消化和吸收功能關(guān)系密切;構(gòu)成腸腺的細(xì)胞有柱狀細(xì)胞、杯狀細(xì)胞、潘氏細(xì)胞和未分化細(xì)胞。柱狀細(xì)胞和內(nèi)分泌細(xì)胞與絨毛上皮相似,接近絨毛的柱狀細(xì)胞與吸收細(xì)胞相似,絨毛深部的柱狀細(xì)胞微絨毛少而短,不形成紋狀緣。小腸有三種功能即消化、吸收和分泌及運(yùn)動功能,其中以吸收和分泌功能為主。小腸腔面的環(huán)行皺襞從幽門附近開始出現(xiàn),在十二指腸末段和空腸頭段極發(fā)達(dá),向下逐漸減少和變矮,至腸中段以下基本消失。粘膜表面還有許多細(xì)小的腸絨毛,是由上皮和固有層向腸腔突起而成,形狀不一,以十二指腸和空腸頭段達(dá)。絨毛于十二指腸呈葉狀,于空腸呈指狀,于回腸則細(xì)而短。環(huán)行皺襞和絨毛使小腸表面積擴(kuò)大20-30倍,絨毛根部的上皮下隱至固有層形成管狀的小腸腺,又稱腸隱窩,故小腸腺與絨毛的上皮是連續(xù)的,小腸腺直接開口于腸腔。
方法簡介:
實(shí)驗(yàn)室分離的兔小腸隱窩上皮采用先機(jī)械分離法、后膠原酶消化法并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
實(shí)驗(yàn)室分離的兔小腸隱窩上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
包被條件:鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣
傳代特性:可傳1-2代
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔小腸隱窩上皮體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細(xì)胞,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
小鼠趨化因子(mouse RAES) 作用: ELISA 規(guī)格: 進(jìn)口分裝
小鼠抵抗素(mouse Resistin) 作用: ELISA 規(guī)格: 進(jìn)口分裝
小鼠可溶性破骨細(xì)胞異化因子(mouse sRANKL) 作用: ELISA 規(guī)格: 進(jìn)口分裝
小鼠血清淀粉樣蛋白(mouse SAA) 作用: ELISA 規(guī)格: 進(jìn)口分裝
小鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子3(-3)ELISA 試劑盒 96T/48T
Human immunoglobulin heavy chain (IgH) ELISA Kit 重鏈(IgH)試劑盒
HumanPulmonarysurfatca-associatedproteinA,SP-AELISAKit 人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Fishi-iodothyronine,T3試劑盒魚類三甲狀腺原(T3)試劑盒規(guī)格:96T/48T
真菌/酵母非蛋白/游離巰基含量比色法定量試劑盒20次
MouseCompleme1inhibitoraoaibody,C1INHELISAKit小鼠補(bǔ)體1抑制物抗體(C1INH)試劑盒規(guī)格:96T/48T
ARCH抗體
溶質(zhì)載體家族蛋白20成員A1抗體
NA重組甲型流感 H3N2 神經(jīng)酶 (Neuraminidase / NA) (E119V mutation) (高活性) Protein
PSCA 前列腺干細(xì)胞抗原 0.5mgPSCA 前列腺干細(xì)胞抗原
NOG重組人 Noggin / NOG 蛋白 Protein
COASY Protein Human 重組人 COASY / CoA synthase 蛋白
EPHB6 Protein Human 重組人 EphB6 / EphB6 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
PSCA 前列腺干細(xì)胞抗原 0.5mgPSCA 前列腺干細(xì)胞抗原
COASY Protein Human 重組人 COASY / CoA synthase 蛋白
NA重組甲型流感 H3N2 神經(jīng)酶 (Neuraminidase / NA) (E119V mutation) (高活性) Protein
EPHB6 Protein Human 重組人 EphB6 / EphB6 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
NOG重組人 Noggin / NOG 蛋白 Protein
兔小腸隱窩上皮細(xì)胞大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP9)試劑盒 ,英文名: MMP9 ELISA Kit
Mouse ansforming growth factor beta 1 (TGF- beta 1) ELISA Kit 小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)試劑盒
Ratα-glathioneS-ansferases,α-GSTELISAKit 大鼠αS轉(zhuǎn)移酶(α-GST)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforFAS/CD95ELISAKit大鼠凋亡相關(guān)因子
細(xì)胞甲戊二羥酸激酶(mevalonatekinase)活性比色法定量試劑盒20次
RatN-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAGELISAKit大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)試劑盒規(guī)格:96T/48T
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細(xì)胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細(xì)胞接種時濃度要稍大一些,至少為5×108細(xì)胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,漂浮;
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細(xì)胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細(xì)胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行;
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進(jìn)行分瓶試驗(yàn);
4、長期培養(yǎng)時,淋巴細(xì)胞中要加入生長因子,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,以利細(xì)胞生長;
5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時才能進(jìn)行