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斑點(diǎn)和狹線印跡是一種將混合的未經(jīng)分離的面定于硝酸纖維素膜或尼龍膜上進(jìn)行雜交分析的簡(jiǎn)單技術(shù)。用來(lái)檢測(cè)被印跡的1DNA制品中靶序列的相對(duì)豐度。
實(shí)驗(yàn)方法
- 多樣抽濾法
| 實(shí)驗(yàn)材料 | DNA |
|---|---|
| 試劑、試劑盒 | SSC NaCl NaOH Tris·Cl |
| 儀器、耗材 | 紫外透射儀 電泳儀 多樣抽濾加樣器 |
| 實(shí)驗(yàn)步驟 | 1. 裁一張與多樣過(guò)濾加樣器一樣大小的尼龍膜，將膜置于6×SSC的表面讓其自然浸沒(méi)。放置10 min。 2. 裁一張與多樣過(guò)濾加樣器一樣大小的Whatman 3 MM 濾紙，用6×SSC浸濕。 3. 將Whatman 3 MM 濾紙置于多樣抽濾加樣器上，將膜放置于其上。將多樣抽濾加樣器按廠商說(shuō)明書(shū)安裝好，確保裝置中不漏氣。 4. 在DNA中加入20×SSC使其終濃度為6×SSC，體積為200~400 μl，在100℃變性10 min，然后置于冰中。 5. 連接吸液裝置與多樣抽濾加樣器，每孔中加入500 μl 6×SSC。 6. 將DNA樣品離心5 s，將樣品加于各孔中，小心勿讓吸頭觸及膜，讓樣品濾過(guò)。 7. 拆開(kāi)多樣過(guò)濾加樣器裝置，將膜置于一張浸過(guò)變性液的Whatman 3 MM 濾紙上，放置10 min。 8. 將膜轉(zhuǎn)至一張浸過(guò)中和液的的Whatman 3 MM 濾紙上。放置5 min。 9. 將膜置于一張Whatman 3 MM 濾紙上，晾干。 10. 將尼龍膜置于可透過(guò)紫外線的塑料夾層中，將有DNA的一面朝下置于紫外透射儀上照射適當(dāng)?shù)臅r(shí)間以固定DNA。 |
